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上機生化

過氧化氫酶 CAT

實驗流程具體步驟以說明書為準(zhǔn)):

1. 樣品準(zhǔn)備

血清、血漿、透明液體狀樣本、動植物組織,細(xì)胞等

2. 檢測前準(zhǔn)備

處理樣本,配制試劑

3. 檢測步驟

加樣-加試劑-顯色反應(yīng)后酶標(biāo)儀讀數(shù)

4. 實驗結(jié)果

樣本OD值代入公式計算出結(jié)果,以EXCEL形式發(fā)出


送樣運輸要求:

1、動植物組織樣本(干冰運輸)

①動物處死后5min內(nèi)取樣,全程冰上操作,先取易降解的組織,如胰腺、腸、胃等,再取其它組織,組織塊至少取50mg以上(黃豆大?。?。組織取好后用預(yù)冷的PBS輕輕漂洗掉樣本表面的血污,例如心、肝、脾、腎等血污較多的組織,可用預(yù)冷PBS清洗多次,直至血污清洗干凈,用濾紙吸干組織表面液體,立即放入EP管或凍存管中-80℃保存。

②腸,胃,血管,食管,子宮等標(biāo)本,取材后立即把組織切開用預(yù)冷PBS清洗多次,去除內(nèi)容物,用濾紙吸干組織表面液體,立即放入EP管或凍存管中-80℃保存。

③剛孵化的斑馬魚離心后至少提供黃豆大小的數(shù)量。

④視網(wǎng)膜需單獨剝離,小鼠至少需要4個視網(wǎng)膜合并,大鼠至少需要2個視網(wǎng)膜合并。

⑤皮膚樣本需去凈毛發(fā)。

2、血清樣本(干冰運輸)

全血標(biāo)本加到促凝管(黃色管蓋,QX0028)或者無菌無酶的EP管(EP-150X-J)中室溫靜置2小時后于2-8℃ 3000rpm/min離心15min,取上清放于-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。

3、血漿樣本(干冰運輸)

全血樣本置于肝素抗凝管內(nèi)(綠色管蓋,QX0012),采血量為抗凝管標(biāo)注體積的80%-100%,血量勿超過抗凝管標(biāo)注體積否則抗凝效果不佳,血量不少于80%標(biāo)注體積,否則樣本會被抗凝劑稀釋。輕輕顛倒混勻,30分鐘內(nèi)于2-8℃ 3000rpm/min離心15min,取上清放于-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。

4、細(xì)胞樣本(細(xì)胞量至少107,細(xì)胞沉淀黃豆大小,干冰運輸)

貼壁細(xì)胞:①培養(yǎng)好的細(xì)胞棄培養(yǎng)基,加入PBS,用細(xì)胞刮沿一個方向輕輕刮下細(xì)胞,切記不要反復(fù)刮,避免細(xì)胞刮破。②細(xì)胞液收集至離心管內(nèi),4℃低速離心(不超過3000rpm)5min,去上清,收集細(xì)胞沉淀,細(xì)胞沉淀要有黃豆大小。

懸浮細(xì)胞:①將細(xì)胞及培養(yǎng)基一起吸入離心管中,4℃低速離心(不超過3000rpm)5 min,去上清,收集細(xì)胞沉淀。②加入1mL PBS溶液重懸細(xì)胞,將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到1.5mL離心管中,4℃低速離心(不超過3000rpm)5min,去上清,收集細(xì)胞沉淀,細(xì)胞沉淀要有黃豆大小。

細(xì)胞上清:取細(xì)胞培養(yǎng)基于2-8℃,3000rpm/min離心15min取上清,于-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。

備注:不要寄送培養(yǎng)板或培養(yǎng)瓶,運輸過程中細(xì)胞容易脫落且造成細(xì)胞活力下降,培養(yǎng)板有漏液風(fēng)險,造成樣本污染。

僅供科研用途,不可用于臨床診斷!