服務(wù)介紹：

　　蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)指的是大規(guī)模、高通量地研究一個細胞、組織或物種中表達的全套蛋白質(zhì)的學(xué)科。近十年來，質(zhì)譜技術(shù)的飛速發(fā)展大大推動了的蛋白質(zhì)組學(xué)的進步，基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)已經(jīng)成為蛋白質(zhì)研究領(lǐng)域必不可少的技術(shù)手段。通過蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可以對生物樣本中的蛋白質(zhì)、翻譯后修飾位點(如磷酸化)進行大規(guī)模地鑒定或定量，進而從高通量的數(shù)據(jù)分析中挖掘有價值的信息和規(guī)律，為功能機制的探究提供線索和基礎(chǔ)。2003年，人類基因組計劃(HGP)完成精細圖的繪制后，同年，人類蛋白質(zhì)組學(xué)計劃(HPP)隨即開展起來，反映了科研領(lǐng)域?qū)Φ鞍踪|(zhì)組學(xué)的重視。經(jīng)過十年時間，多家單位的共同努力下，人類蛋白質(zhì)組草圖也于2014年在Nature雜志公布了。

　　SWATH/DIA是一項區(qū)別于DDA采集的全新的、全息式的質(zhì)譜技術(shù)，將掃描范圍劃分為以25 Dalt為間隔的一系列區(qū)間，通過超高速掃描來獲得掃描范圍內(nèi)全部離子的所有碎片信息，是 MS/MS ALL技術(shù)的擴展。SWATH/DIA采用數(shù)據(jù)非依賴性的掃描采集模式，將掃描區(qū)間內(nèi)所有的肽段母離子經(jīng)過超高速掃描并進行二級碎裂，使用二級碎片離子進行蛋白相對/絕對定量，從而獲得完整的肽段信息。DIA/SWATH技術(shù)是一種真正全景式、高通量的質(zhì)譜技術(shù)，同時也大大提高了定量的可重現(xiàn)性。

　　蛋白質(zhì)磷酸化是生物體中最常見、最重要的一種蛋白質(zhì)翻譯后修飾方式，它可以通過激發(fā)、調(diào)節(jié)諸多信號通路進而參與調(diào)控生物體的生長、發(fā)育、逆境應(yīng)激、疾病發(fā)生等多種生命過程，所以磷酸化一直是生物學(xué)研究的重點與熱點。磷酸化蛋白質(zhì)組(Phosphoproteomics)以組織、細胞等較為復(fù)雜樣本為研究對象，目的在于鑒定樣品中發(fā)生磷酸化的蛋白質(zhì)以及相應(yīng)的磷酸化位點。

　　將磷酸化肽段富集技術(shù)與SWATH技術(shù)相結(jié)合，實現(xiàn)對磷酸化蛋白質(zhì)組定性、定量的研究。

　　實驗結(jié)果展示：

　　圖1 磷酸化蛋白組一般流程思路

　　實驗流程：

　　蛋白提取—蛋白酶解—磷酸化肽段富集—DIA方式采集數(shù)據(jù)—數(shù)據(jù)庫檢索—數(shù)據(jù)分析

　　送樣運輸要求：

　　1、蛋白樣本

　?、俚鞍琢看笥?00ug，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復(fù)凍融。

　?、诮ㄗh測定蛋白濃度后，液氮速凍，避免蛋白降解，另外需要告知蛋白溶液的緩沖液成分和濃度，方便實驗室收到后進行后續(xù)處理。

　?、勰z條、膠點樣本不建議進行定量蛋白質(zhì)組學(xué)。

　　2、細胞樣本

　　①細胞量1x10⁷個，收集細胞沉淀，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復(fù)凍融。

　?、谑占瘯r，用預(yù)冷PBS緩沖液清洗三次，去除培養(yǎng)基成分，然后離心去除上清保存。

　　3、血清樣本

　?、贅颖玖?00uL，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復(fù)凍融。

　　②樣本應(yīng)盡量避免溶血。

　　4、血漿樣本

　?、贅颖玖?00uL，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復(fù)凍融。

　　②樣本應(yīng)盡量避免溶血。

　　5、尿液樣本

　?、贅颖玖?mL，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復(fù)凍融。

　?、跇悠窇?yīng)盡量避免帶入糞便殘渣。

　　6、動物組織樣本

　?、贅颖玖?00mg，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復(fù)凍融。

　?、谑占瘯r，用預(yù)冷PBS緩沖液沖洗表面血液，并用濾紙吸干多余水分，避免凍存時結(jié)冰。

　　③固定液浸泡過的樣本無法進行檢測。

　　7、植物組織樣本

　?、贅颖玖?00mg，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復(fù)凍融。

　　②收集時，用預(yù)冷PBS緩沖液沖洗表面泥沙，并用濾紙吸干多余水分，避免凍存時結(jié)冰。

　?、酃潭ㄒ航葸^的樣本無法進行檢測。

　　8、微生物樣本

　?、贅颖玖扛芍?00mg，-80℃保存，純干冰運輸，避免反復(fù)凍融。

　?、谑占瘯r，用預(yù)冷PBS緩沖液清洗三次，去除培養(yǎng)基成分，然后離心去除上清保存。

僅供科研用途，不可用于臨床診斷！