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保存運輸方法
保存運輸方法

保存運輸方法

透射電鏡樣本準備方法及要求

作者：admin2025-03-11 13:49 熱度：688

實驗目的：觀察細胞內部細胞器的結構及變化，如線粒體，內質網，自噬體等。以下所有樣本必須盡量新鮮，固定液或懸浮液都不得冷凍結冰!


樣本類型

樣品保存運輸要求

動物組織樣本①1-3min  內取樣，取樣組織2mm×2mm  大小，盡量薄。固定液滲透能力有限，超出 此范圍后組織會無法完全固定，后續(xù)實驗無法完成，務必請重視此過程。
②取材時盡量精確到需要觀察的目的部位(如觀察腎小球取腎皮質；觀察胰島取胰島豐富的 胰尾；皮膚、腸胃等在固定液中易打卷的組織可將組織粘在濾紙上進行固定)。
③取材時一定注意避免鑷子擠壓等機械損傷，刀片要鋒利避免挫傷組織。
④組織取下后立即投入電鏡固定液內避光室溫固定2h,再轉移至4℃保存，4℃冰袋運輸，在 保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。4℃時樣本可保存1個月左右。
植物組織樣本①取材要求同動物組織樣本。
②組織投入固定液后需要進行真空抽氣讓組織沉底，如無條件抽氣可用濾紙將組織塞進固定液 內，組織不能漂浮在固定液表面。
細胞樣本貼壁細胞：
方法一 ：
①培養(yǎng)好的細胞棄培養(yǎng)基，加入2.5%的常溫戊二醛固定液。
②常溫避光固定5min左右，用細胞刮(或軟橡膠蓋切的平整小方塊)沿一個方向輕輕刮下 細胞，切記不要反復刮，避免細胞刮破。
③用巴氏吸管把細胞液吸入離心管內，放入離心機(不超過3000轉),離心2min左右， 細胞團要有綠豆大小。
④棄固定液后加新的電鏡固定液，把細胞團輕輕挑起，懸浮于固定液中。
⑤室溫避光固定30min,   再轉移至4℃保存，4℃冰袋運輸，在保存和運輸過程中固定液切
勿冷凍結冰。
方法二：(對細胞形態(tài)沒有要求的)
①培養(yǎng)好的細胞棄培養(yǎng)基，加入胰酶。
②胰酶消化好后(時間不宜過長),用培養(yǎng)基終止消化，用吸管把細胞吹下來。吸入離心管， 離心(不超過3000轉),2min左右，細胞團要有綠豆大小。
③棄上清，加入2.5%的常溫戊二醛固定液，把細胞團輕輕挑起，懸浮于固定液中。
④室溫避光固定30min,  再轉移至4℃保存，4℃冰袋運輸，在保存和運輸過程中因定液切
勿冷凍結冰。
懸浮細胞：
離心收集細胞要肉眼可見細胞沉淀綠豆大小，棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液室溫避光固定30min, 再轉移至4℃保存，4℃冰袋運輸，在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。
細菌樣本長于固體培養(yǎng)基的細菌：   將細菌連帶著培養(yǎng)基一起挑下放于電鏡固定液內室溫避光固定2h, 再轉移至4℃保存，4℃冰袋運輸，在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。

懸浮細菌孢子等：離心收集細菌要肉眼可見細菌沉淀綠豆大小，棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液室  溫避光固定2h,再轉移至4℃保存，4℃冰袋運輸，在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。
病毒破碎組織細胞，粗離心去除細胞碎片取上清，超速離心分離出病毒(病毒提取的過程需要客 戶自己完成)。用緩沖液(如PBS)懸浮病毒，體積至少50μL,遠距離干冰凍存運輸，近距 離4℃保存運輸，盡快滴片做負染后及時電鏡觀察拍照。
外秘體囊泡等客戶自己完成外泌體囊泡等的提取收集，用緩沖液(如PBS)或者試劑盒中的保存液懸浮，體 積至少50μL,遠距離干冰凍存運輸，   近距離4℃保存運輸，盡快制片做負染后及時電鏡觀察 拍照(因此類樣品極易降解，樣品越新鮮越好，最好數(shù)小時內完成滴片負染，否 則做出的效 果很不理想甚至完全觀察不到)。
納米材料等無機材料直接準備粉劑或用緩沖液(如PBS)懸浮，常溫保存運輸即可(需要超聲的備注)。做負染后 電鏡觀察拍照。