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一、原理
骨質(zhì)疏松癥是一種以骨密度降低為特征的系統(tǒng)性骨骼疾病。骨穩(wěn)態(tài)由吸收骨骼的破骨細(xì)胞和形成骨骼的成骨細(xì)胞維持。這種體內(nèi)平衡可能會因各種原因而失衡,其中絕經(jīng)引起的荷爾蒙變化是破骨細(xì)胞活性異常的原因。卵巢切除(OVX)小鼠模型是國際公認(rèn)的模擬絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的經(jīng)典動物模型,具有高度的病理相似性和可重復(fù)性,為藥物研發(fā)及機(jī)制研究提供理想平臺。
二、OVX模型構(gòu)建
(1) 將11 周齡的 C57BL/6J 小鼠麻醉,通過足趾夾捏反射消失確認(rèn)麻醉。
(2) 將大鼠腰背部剃毛,碘伏消毒。
(3) 在脊柱兩側(cè)1cm處各作一個縱向切口(長度0.5cm),鈍性分離肌肉層,找到包裹卵巢的脂肪墊。
(4) 結(jié)扎輸卵管-子宮連接處,完整切除卵巢。
(5) 逐層縫合肌肉與皮膚,碘伏消毒,單籠常規(guī)飼喂,術(shù)后6-7周成模。
三、模型評價及后續(xù)檢測
1. 骨結(jié)構(gòu)觀察
通過Micro-CT(計(jì)算機(jī)斷層掃描)觀察骨結(jié)構(gòu),可選擇性呈現(xiàn)骨密度(BMD)、骨體積/總體積( BV/TV)、骨表面積/骨體積(BS/BV)、骨表面積/總體積 (BS/TV),骨小梁數(shù)目(Tb.N)、以及骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁間隔(Tb.sp)等。
(圖片來源于文獻(xiàn) PMID:34184079,僅做結(jié)果解圖示例。)
2. HE
H&E 染色結(jié)果顯示,假手術(shù)組骨小梁(BM)應(yīng)呈現(xiàn)正常網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),排列緊密且連續(xù),厚度均勻。OVX 組骨小梁(BM):稀疏、斷裂,網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)破壞,厚度變薄,間隙增大。
3. TRAcP
骨切片的TRAcP活性染色(紅色區(qū)域標(biāo)識破骨細(xì)胞,TRAP為破骨細(xì)胞標(biāo)志酶,特異的分布于破骨細(xì)胞中)表明,與假手術(shù)組小鼠相比,OVX組小鼠骨組織中的破骨細(xì)胞數(shù)量增多。
4. IHC(免疫組化)
骨吸收標(biāo)志物 MMP9 和 NFATc1 的 IHC 分析顯示,與假手術(shù)組相比,OVX 組的 MMP9 和 NFATc1 陽性細(xì)胞數(shù)量顯著增加。( MMP9、NFATc1是介導(dǎo)破骨細(xì)胞生長中的重要開關(guān))
參考文獻(xiàn)
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