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原位雜交

原位雜交

實驗介紹:

原位雜交技術(shù)(in situhybridization)是以標記的核酸分子為探針,在組織細胞原位檢測特異核酸分子的技術(shù)。 使含有特異序列、經(jīng)過標記的核酸單鏈即探針,在適宜條件下與組織細胞中的互補核酸單鏈即靶核酸發(fā)生雜交,再以放射自顯影或免疫細胞化學方法對標記探針進行探測,從而在細胞原位顯示特異的DNA或RNA分子


實驗流程:

DAB: 組織切片脫蠟至水—畫圈消化—預雜交—雜交過夜— 滴加鼠抗地高辛標記過氧化物酶(anti-DIG-HRP)—DAB顯色— 蘇木素染核—脫水透明—封片鏡檢

熒光:組織切片脫蠟至水—畫圈消化—預雜交—雜交過夜— 滴加鼠抗地高辛標記過氧化物酶(anti-DIG-HRP)—TSA熒光素— Dapi染核—封片鏡檢

 

注意事項:

(1)石蠟切片:組織取樣后應立即置于固定液中,常溫運輸切勿冷凍結(jié)冰;

(2)冰凍切片:-20度運輸


實驗結(jié)果展示:

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 Fish                                                CD68+探針                                     CK19+探針