實驗原理

熒光素酶報告基因系統是以熒光素(luciferin) 為底物來檢測熒光素酶活性的一種報告系統。熒光素酶可 以催化 luciferin 氧化成 oxyluciferin, 在 luciferin 氧化的過程中，會發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。然后  可以通過熒光測定儀(化學發(fā)光儀)測定 luciferin 氧化過程中釋放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物 發(fā)光體系，可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達。

雙熒光素酶體系，即有兩種熒光素酶，比較常見的組合是螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶，螢火蟲熒光 素酶作用于甲蟲熒光素，而海腎熒光素酶在氧的存在下作用于海腎熒光素。以其中一個作為內參對照，即表 達量基本恒定，用于減少試驗中不同處理間所固有的變化，包括培養(yǎng)細胞的數目及活力的差異，細胞轉染及 裂解的效率，而另外一個熒光素酶則作為報告基因，用于指示不同處理條件下基因的表達情況。

實驗應用

潛在啟動子/啟動子核心區(qū)域檢測；

潛在增強子/抑制子等調控子核心元件檢測；

啟動子區(qū)可能的轉錄因子結合位點檢測；

啟動子/增強子與轉錄因子的相互作用；

病毒/細胞相互作用；

藥物等化學誘導因素對啟動子活性的調節(jié)(抑制或增強);

射線等物理誘導因素對啟動子活性的調節(jié)(抑制或增強);

microRNA 靶基因驗證。

以雙熒光素酶實驗進行 microRNA 靶基因驗證為例，介紹相關的實驗流程。

結果展示

pGL3-Basic Vector為骨架插入目的基因5'-UTR 序列

熒光素酶質粒構建