細(xì)胞分板實(shí)驗(yàn)介紹  

細(xì)胞分板是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的基礎(chǔ)核心技術(shù)，旨在將消化處理后的單細(xì)胞懸液均勻分配至培養(yǎng)板（如6孔板、24孔板、96孔板等）各孔中，為后續(xù)藥物篩選、增殖檢測、毒性分析等高通量實(shí)驗(yàn)提供標(biāo)準(zhǔn)化細(xì)胞樣本。理想的分板需確?？组g一致性（細(xì)胞數(shù)量、活性、分布均勻），避免因局部過密或過疏導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)偏差。  

適用場景包括：  

- 藥物篩選：96孔板梯度濃度藥效測試  

- 細(xì)胞功能研究：如凋亡檢測、轉(zhuǎn)染效率分析  

- 高通量檢測：MTT/MTS、熒光成像等  

實(shí)驗(yàn)流程  

1. 單細(xì)胞懸液制備  

- 消化處理：棄原培養(yǎng)基→PBS清洗→胰酶消化（時間依細(xì)胞類型調(diào)整，鏡檢至細(xì)胞變圓脫落）  

- 離心重懸：800-1000rpm離心5min→棄上清→加培養(yǎng)基輕柔吹打至無團(tuán)塊單細(xì)胞態(tài)  

2. 細(xì)胞計(jì)數(shù)與稀釋  

- 血球計(jì)數(shù)板法：計(jì)算懸液密度（公式：細(xì)胞數(shù)/ml = (4大格總數(shù)/4)×10?×稀釋倍數(shù)）  

- 梯度稀釋：按目標(biāo)接種量（如96孔板常為5×103~1×10?/孔）調(diào)整濃度  

3. 接種與搖勻  

- 低張力加液法：  

  - 每孔預(yù)鋪少量培養(yǎng)基潤底→沿孔壁左側(cè)緩慢注入細(xì)胞懸液  

  - 十字搖勻法：水平面“十”字軌跡平移5~6次（避免旋轉(zhuǎn)搖動導(dǎo)致中央聚集）  

  - 輕拍法（適用多孔板）：封閉板蓋→水平拍擊右側(cè)/前側(cè)各10次促均勻分布  

- 靜置貼壁：工作臺靜置10min→移入37℃ CO?培養(yǎng)箱  

送樣要求  

為確保分板質(zhì)量，請?zhí)峁┮韵滦畔⒓皹颖荆?/span>  

1. 細(xì)胞樣本：  

   - 活細(xì)胞≥1×10?，活性>90%（附活性檢測報(bào)告）  

   - 運(yùn)輸方式：T25瓶貼壁培養(yǎng)（推薦）或凍存管（需復(fù)蘇驗(yàn)證）  

2. 培養(yǎng)條件：  

   - 培養(yǎng)基配方、血清濃度、添加劑種類  

   - 貼壁/懸浮類型、消化酶種類及耐受時間  

3. 分板參數(shù)：  

   - 培養(yǎng)板類型（孔數(shù)、材質(zhì)）  

   - 目標(biāo)接種密度/孔（參考下表）  

培養(yǎng)板規(guī)格與推薦接種密度對照表  

| 培養(yǎng)板類型 | 每孔培養(yǎng)面積 (cm2) | 建議接種密度 (cells/孔) | 培養(yǎng)基體積 (μL) |  

| 96孔板     | 0.3                 | 1×103 ~ 1×10?           | 100~200        |  

| 24孔板     | 2.0                 | 5×10? ~ 2×10?           | 500~1000       |  

| 12孔板     | 3.8                 | 1×10? ~ 5×10?           | 1~2 mL         |  

| 6孔板      | 9.6                 | 2×10? ~ 1×10?           | 2~3 mL         |  

注意事項(xiàng)  

關(guān)鍵操作要點(diǎn)  

- 消化控制：過度消化損傷活性，不足則致團(tuán)塊。新細(xì)胞系需預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化時間  

- 搖勻技巧：輕拍法力度需適中（培養(yǎng)基晃動但不濺灑），顯微鏡下驗(yàn)證均勻性后靜置  

- 邊緣效應(yīng)：96孔板外圍孔易蒸發(fā)，建議外周孔加PBS緩沖，僅用中央60孔接細(xì)胞  

環(huán)境與質(zhì)控  

- 生物安全柜規(guī)范：  

  - 潔凈區(qū)（耗材）→操作區(qū)（試劑）→污染區(qū)（廢液）分區(qū)擺放，避免遮擋進(jìn)氣格柵  

  - 操作時手臂垂直緩入，減少氣流擾動  

- 污染預(yù)防：  

  - 操作臺紫外滅菌30min→風(fēng)機(jī)預(yù)運(yùn)行10min→試劑入柜前表面消毒  

  - 避免培養(yǎng)箱鄰近振動源（離心機(jī)、渦旋儀）影響貼壁  

特殊需求適配  

- 免疫熒光：可接受周邊稍密鋪板（便于觀察邊緣細(xì)胞）  

- 高通量分選：需96/384孔板分選時，可聯(lián)合磁珠分選（如STEMCELL EasySep?）或微流控芯片技術(shù)，提升速度與活性  

備注：以上內(nèi)容基于標(biāo)準(zhǔn)化操作編寫，個性化實(shí)驗(yàn)（如原代細(xì)胞分板、共培養(yǎng)體系）請咨詢技術(shù)團(tuán)隊(duì)定制方案。 

官網(wǎng)：m.intechopen.com.cn     預(yù)約電話：15392937510