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外泌體

外泌體提取

服務(wù)介紹:


  外泌體(exosome):是細(xì)胞主動向胞外分泌的大小均一(40-200nm)的囊泡樣小體,該囊泡可攜帶多種蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA等,參與細(xì)胞通訊、細(xì)胞遷移、血管新生和腫瘤細(xì)胞生長等過程。根據(jù)外泌體的大小和密度,用不同的離心速度,達(dá)到分離出外泌體的超速(差速)離心法,是學(xué)術(shù)上用的比較多且較認(rèn)可的外泌體的提取方法,被認(rèn)為是外泌體提取的黃金方法。


囊泡大?。╪m)密度(g/mL)來源標(biāo)記
外泌體40-2001.13-1.18內(nèi)體(endosomes)tetraspanins, Alix, TSG101,CD4,CD9
微泡200-20001.16-1.19質(zhì)膜(plasma membrane )integrins, selectins, CD40
凋亡小體500-20001.16-1.28質(zhì)膜,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(plasma membrane, endoplasmic reticulum)phosphatidylserine, genomic DNA

Ref: Huilin Shao et al,New Technologies for Analysis of Extracellular Vesicles,Chem.Rev. 2018,118:1917-1950



  外泌體應(yīng)用領(lǐng)域:


  外泌體參與不同細(xì)胞間的物質(zhì)傳輸和信號傳遞;

  外泌體具備一些免疫調(diào)節(jié)功能(由于有大量免疫相關(guān)分子:抗原傳遞分子、熱休克蛋白等);

  外泌體參與細(xì)胞廢物的排泄和處理;

  不同來源的外泌體有其特異性,存在著不一樣的功能;

  外泌體已廣泛的被用在醫(yī)學(xué)臨床疾病的診斷以及相關(guān)預(yù)防研究上;

  外泌體可能被當(dāng)做一種藥物的載體等



  實驗結(jié)果展示:


  1、大鼠血清外泌體提取-蛋白濃度檢測

12.jpg


  2、SW1990細(xì)胞外泌體提取-蛋白濃度檢測

未ds題-1.jpg




  實驗流程:


  低速離心去除碎片-過濾-高速離心-超速離心-蛋白濃度檢測

注:外泌體提取后,可另收費(fèi)進(jìn)行電鏡負(fù)染和WB檢測(tsg101,cd9,cd63三選二)



  送樣運(yùn)輸要求:


  細(xì)胞上清樣本:一個樣本提供70ml的培養(yǎng)上清(細(xì)胞在含常規(guī)FBS培養(yǎng)基中培養(yǎng)一定時間,待細(xì)胞融合度約為60% - 70%時,移去原有含F(xiàn)BS的培養(yǎng)基,換成新鮮的含無外泌體血清的培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)3天左右,細(xì)胞融合度達(dá)到80%-95%左右時,收取細(xì)胞上清),干冰運(yùn)輸?shù)綄嶒炇摇?/span>

  血清樣本:血液經(jīng)普通采血管采集后室溫靜置30min,3000g離心15min,收集上層血清,5ml,-80℃純干冰運(yùn)輸。


僅供科研用途,不可用于臨床診斷!