技術(shù)服務(wù)訂單——分子組（生化、ELISA）

技術(shù)服務(wù)訂單——分子組（生化及ELISA）.doc

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送  樣  要  求

1.1 全血

全血是進行血常規(guī)檢測的唯一適合樣本類型。

取血前，建議給動物打EDTA，用抗凝劑清洗取血針。如果使用EP管作為取血管，EP管也使用EDTA潤洗并在取血后添加EDTA。使用EP管運送全血樣本必須添加抗凝劑。如使用抗凝管，推薦使用EDTA管（紫色采血帽），取樣后上下輕輕顛倒使抗凝劑與血液充分混勻。血樣與抗凝劑的比例為1.5-2mg EDTA抗凝1mL全血。

全血須在4℃運輸，絕對不可以冷凍運輸，運輸過程中血樣不可與冰袋直接接觸，不可猛烈撞擊。因為紅細(xì)胞在機械性強力振蕩或冷凍條件下會破裂，從而出現(xiàn)溶血，影響檢測。

抗凝全血僅適用于血常規(guī)檢測，不適用于運輸后再離心取血漿或析出血清用于其他項目檢測。因為其必須保持在4℃左右運輸，所以血液中的許多成分容易降解，從而影響檢測結(jié)果。建議客戶事先分離出血清或者血漿并置于-20℃條件下運輸（干冰件）。

1.2 血漿

血漿由全血樣本采集30min內(nèi)于2-8℃3500—4000r離心10—15min，取上清即為血漿樣本?？梢粤⒓催M行檢測或進行分裝。分裝后的樣本須在-20℃—-80℃保存。解凍后的樣本須再次離心后進行檢測。血漿需要在取全血后立刻離心制備，此過程中抗凝劑推薦使用0.109mol/L枸櫞酸鈉，此時抗凝劑與全血的體積比為1:9。不要使用肝素鈉或者EDTA抗凝，避免干擾測量結(jié)果。

1.3 血清

血清也由全血樣本制備而成。取全血后放于EP管（此時不要添加任何抗凝劑，推薦有條件的可以添加促凝劑），4℃放置3h以上；待全血充分凝固后，離心3000-3500rpm、15min左右即可制備得到血清。血清可以立即檢測，或放置于-20℃—-80℃保存。

血清應(yīng)盡可能避免溶血，溶血（血細(xì)胞破裂，細(xì)胞內(nèi)液、血紅蛋白等進入血清中）會對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響，尤其是自動生化的結(jié)果。

血清中含有各種血漿蛋白（白蛋白，球蛋白）、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、酶、無機物等。主要用于生化檢測。

2. 組織樣本

組織樣本取樣應(yīng)盡量不低于0.1g，過少的組織樣本難以進行稱重（公司天平稱量精度有限），從而影響后續(xù)的PBS或其他研磨提取液的加入（可能會導(dǎo)致數(shù)值偏差較大，測不準(zhǔn)）。取樣后將樣本放置于干凈的離心管中，-20℃—-80℃保存，運輸。

組織上清的制備：稱取組織重量，按照1g固體組織:9ml 勻漿介質(zhì)的比例添加研磨提取液。冰浴勻漿后，制成10%的勻漿液，然后在12000r/min，4℃下離心10-15分鐘，吸取上清，即可得到組織上清液。上清液可以立即進行檢測或置于-20℃—-80℃保存，運輸。

組織樣本的采集制備注意事項如下：

l 組織樣本采集后，應(yīng)立即用等滲溶液（PBS或生理鹽水）盡量把血液漂洗干凈（除非血液也是分析對象），用濾紙或紗布吸干

l 組織應(yīng)新鮮，操作時間盡可能短，否則細(xì)胞發(fā)生死后變化、自融及腐敗現(xiàn)象。最好是動物心臟還在跳動時采集，樣本取出后最好在5分鐘以內(nèi)置于固定液內(nèi)，避免長時間暴露在空氣環(huán)境中

l 勿使組織塊受擠壓。在采集過程中，應(yīng)盡量選擇較為鋒利的手術(shù)器械，如手術(shù)專用刀片等，避免操作過程中擠壓挫傷標(biāo)本。

l 盡量保持組織的原有形態(tài)。新鮮組織經(jīng)固定后，或多或少產(chǎn)生收縮現(xiàn)象（如胃腸），為此可將組織展平，以盡可能維持原形。

l 保持組織清潔。組織塊上如有血液、污物、粘液、食物、糞便等，可用生理鹽水沖洗，然后再入固定液，但要注意防止組織損傷。

l 要熟悉采集部位。要能準(zhǔn)確的按解剖部位采集，如胰腺，一般取胰島較多的胰腺尾部；肺應(yīng)取有細(xì)支氣管及帶有軟骨片的小支氣管部。如果實驗需進行多組織樣本的采集，采集順序應(yīng)按照：消化器官，神經(jīng)系統(tǒng)器官，皮膚，肌肉等的順序進行。

l 選好組織塊的切面。熟悉某些器官組織成分安排，然后決定其切面的走向；如一長管狀器官以橫切面較好。

l 切除不需要的部分。特別是組織周圍的脂肪等，應(yīng)盡可能清除掉，否則給固定、脫水、浸蠟、切片等帶來一些不必要的問題。

3. 細(xì)胞樣本

1. 貼壁細(xì)胞樣本制備流程：吸出細(xì)胞培養(yǎng)液上清；2.加入PBS漂洗后棄掉；3.預(yù)先用蒸餾水水浸泡細(xì)胞刮，擦干。加入適量蒸餾水（0.5mL左右），再用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下（細(xì)胞生長于培養(yǎng)皿底部）；4.將培養(yǎng)皿中刮好的細(xì)胞吸入到研磨管中，即為送樣的細(xì)胞樣本。

2. 懸浮細(xì)胞：培養(yǎng)液3000r/min離心10min，留沉淀，于-20℃—-80℃保存，運輸。

細(xì)胞培養(yǎng)液上清：樣本于2℃—8℃3000r/min離心15min去上清，上清立即用于實驗，或于-20℃—-80℃保存，運輸。

4. 尿液樣本

1)收集晨起中段尿（臨床）或晨間1 h尿（動物）直接分裝到離心管中，2000×g離心15min后取上清。 

3) -20℃—-80℃保存，運輸。。 

5. 植物樣本

葉/莖/花：用錫箔紙包裹并標(biāo)記后，迅速放入液氮中冷凍處理至少 15min。取出后迅速放入自封袋中（每組一袋），在自封袋中放入標(biāo)簽紙注明樣本信息。迅速放入-80℃冰箱凍存。足量干冰寄送。

根：取整株植物的根部，迅速用PBS漂洗掉根上的泥土。根據(jù)實驗需求取植株根特定的部位，500 mg/sample 裝入離心管中。標(biāo)號后迅速放入液氮中冷凍處理至少 15min。-80℃凍存；足量干冰寄送。由于根部組織特別脆弱，被擠壓后會變成漿糊狀，不建議使用錫箔紙包裹

果實/種子：較大的果實需要切割成小塊裝入離心管中，然后放入液氮中冷凍處理至少15min, -80℃凍存；足量干冰寄送。

送植物樣本前請務(wù)必和銷售溝通到底做什么指標(biāo)，因為有的指標(biāo)是需要使用烘干后的植物，烘干脫水后的植物質(zhì)量只有未脫水前的1/15—1/20。為了避免樣本烘干后質(zhì)量不足，請事先跟銷售溝通到底做什么指標(biāo)，從而確定送樣量 

下表為平臺所能做的實驗以及不同樣本類型對應(yīng)的送樣量及運輸條件

細(xì)胞上清：細(xì)胞密度不得低于1百萬/L，* a：指標(biāo)數(shù)，** b：每個指標(biāo)每個樣本所做孔數(shù) 未注明的單位為μL

請您確認(rèn)以上信息無誤，如樣本做完實驗需返還麻煩提前告知，若您對實驗結(jié)果存有疑問，請在一個月內(nèi)及時回復(fù)我們。實驗完成后本公司會將樣本保存三個月，過期限公司將處理，以上規(guī)定期限內(nèi)，本公司將積極配合您對實驗結(jié)果的復(fù)核,若超過以上期限，本公司將不再承擔(dān)責(zé)任和義務(wù)。

衷心感謝您對武漢皮諾飛的信任，祝您實驗順利！