實(shí)驗(yàn)介紹：

掃描電鏡（Scanning Electron Microscope，SEM）利用電子和物質(zhì)的相互作用，可以獲取被測(cè)樣品本身的各種物理、化學(xué)性質(zhì)的信息，如形貌、組成、晶體結(jié)構(gòu)、電子結(jié)構(gòu)和內(nèi)部電場(chǎng)或磁場(chǎng)等等。掃描電子顯微鏡對(duì)二次電子、背散射電子的采集，可直接利用樣品表面材料的物質(zhì)性能進(jìn)行微觀成像，可得到有關(guān)物質(zhì)微觀形貌的信息。掃描電鏡有較高的放大倍數(shù)，20-20萬(wàn)倍之間連續(xù)可調(diào)；有很大的景深，視野大，成像富有立體感，可直接觀察各種試樣凹凸不平表面的細(xì)微結(jié)構(gòu)；試樣制備簡(jiǎn)單，不含水的樣本可以不用固定。

主要用途：

1、三維形貌的觀察和分析。

2、觀察形貌的同時(shí)，進(jìn)行微區(qū)的成分分析。

主要設(shè)備及參數(shù)：

1、平臺(tái)主要設(shè)備：掃描電鏡 tescan，VEGA 3 LMU。

2、掃描電鏡 tescan，VEGA 3 LMU 主要技術(shù)指標(biāo)：

（1）二次電子分辨率：高真空（二次電子3.0nm at 30kV，8.0nm at 3kV）、低真空（低真空二次電子）：3.5nm at 30kV。

（2）放大倍數(shù)：2.5-1000,000。

（3）加速電壓：0.2-30kV。

檢測(cè)原理：

掃描電子顯微鏡電子槍發(fā)射出的電子束經(jīng)過(guò)聚焦后匯聚成點(diǎn)光源；點(diǎn)光源在加速電壓下形成高能電子束；高能電子束經(jīng)由兩個(gè)電磁透鏡被聚焦成直徑微小的光點(diǎn)，在透過(guò)最后一級(jí)帶有掃描線圈的電磁透鏡后，電子束以光柵狀掃描的方式逐點(diǎn)轟擊到樣品表面，同時(shí)激發(fā)出不同深度的電子信號(hào)。此時(shí)，電子信號(hào)會(huì)被樣品上方不同信號(hào)接收器的探頭接收，通過(guò)放大器同步傳送到電腦顯示屏，形成實(shí)時(shí)成像記錄。由入射電子轟擊樣品表面激發(fā)出來(lái)的電子信號(hào)有：俄歇電子（Au E）、二次電子（SE）、背散射電子（BSE）、X射線（特征X射線、連續(xù)X射線）、陰極熒光（CL）、吸收電子（AE）和透射電子。每種電子信號(hào)的用途因作用深度而異。

服務(wù)流程：

1、接受樣本。

2、核對(duì)編號(hào)，溝通切面以及拍照要求。

3、電鏡制樣。

4、鏡下預(yù)覽觀察樣本。

5、正式實(shí)驗(yàn)拍照。

樣本取材要求：

動(dòng)植物組織取材流程及要求：

1、1-3分鐘內(nèi)取樣，組織塊不超過(guò)3mm2，用PBS輕輕漂洗將樣本表面的血污，毛發(fā)等去掉，將需要掃描的面做好標(biāo)記（如在對(duì)面進(jìn)行剪角處理）。

2、取材時(shí)一定注意避免鑷子擠壓等機(jī)械損傷，刀片要鋒利避免挫傷組織。尤其是注意保護(hù)掃描面。

3、組織取下后立即投入電鏡固定液內(nèi)室溫固定2小時(shí)，再轉(zhuǎn)移至4℃保存，4℃冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

4、植物樣本放入固定液后需抽氣沉底。

細(xì)胞樣本取材流程及要求：

1、貼壁細(xì)胞：細(xì)胞必須貼壁于蓋玻片上制成爬片，細(xì)胞棄培養(yǎng)基，用PBS輕輕漂洗后，棄PBS加電鏡固定液室溫固定2小時(shí)，再轉(zhuǎn)移至4℃保存，4℃冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

2、懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞要肉眼可見(jiàn)細(xì)胞沉淀米粒大小，棄培養(yǎng)基后用PBS輕輕漂洗后，棄PBS加電鏡固定液，細(xì)胞必須吹散懸浮于固定液內(nèi)，室溫固定2小時(shí)，再轉(zhuǎn)移至4℃保存，4℃冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

細(xì)菌樣本取材流程及要求：

1、固體培養(yǎng)基的細(xì)菌：細(xì)菌必須貼壁于蓋玻片上制成爬片，用蓋玻片輕輕覆蓋在菌落上，在培養(yǎng)箱培養(yǎng)一晚上，第二天輕輕揭下來(lái)，放入固定液中室溫固定2小時(shí)，再轉(zhuǎn)移至4℃保存，4℃冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

2、懸浮細(xì)菌孢子等：離心收集細(xì)菌要肉眼可見(jiàn)細(xì)菌沉淀芝麻至綠豆大小，棄培養(yǎng)基后用PBS輕輕漂洗后，棄PBS加電鏡固定液，必須吹散懸浮于固定液內(nèi)，室溫固定2小時(shí)，再轉(zhuǎn)移至4℃保存，4℃冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

其他如粉末狀、固體材料取材流程及要求：

直接準(zhǔn)備干燥的粉劑。帶有磁性的金屬材料不能做掃描電鏡。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

水稻掃描電鏡

鼠傷寒沙門氏菌掃描電鏡

樣本要求及注意事項(xiàng)：

1、客戶提供材料要求：

（1）按照標(biāo)準(zhǔn)方法取材固定的實(shí)驗(yàn)樣本（固定在戊二醛固定液中的樣品）。

（2）客戶需要提供拍照的參考圖或者文獻(xiàn)，切面要求，明確拍照區(qū)域、要求、拍照標(biāo)尺。

（3）在保存和運(yùn)輸過(guò)程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

（4）帶有磁性樣本不能檢測(cè)。

（5）非常規(guī)樣本以及特殊拍照要求，請(qǐng)及時(shí)溝通。

2、制備樣本時(shí)間：

（1）實(shí)驗(yàn)室收到樣本后，掃描電鏡在2-3周（15個(gè)工作日）左右拍照。

（2）如果制樣過(guò)程中遇非人為因素影響，時(shí)間會(huì)適當(dāng)延長(zhǎng)。

3、實(shí)驗(yàn)室拍照交付內(nèi)容：每個(gè)樣本采集3個(gè)視野，每一個(gè)視野拍照2-3個(gè)倍數(shù)，每個(gè)倍數(shù)采集1-2張圖片，每個(gè)樣本拍照不超過(guò)18張圖片；根據(jù)拍照的實(shí)際情況，實(shí)驗(yàn)室會(huì)適當(dāng)調(diào)整多拍照片。