服務(wù)介紹：

miRNA引物設(shè)計(jì)是針對(duì)成熟序列設(shè)計(jì)的莖環(huán)引物，長(zhǎng)度大約45bp，可以自身成環(huán)。在3’-端序列的反向互補(bǔ)序列引入一段固定的序列形成一個(gè)莖環(huán)，即為逆轉(zhuǎn)錄引物；在序列的5’-端引入一段固定的序列，即為擴(kuò)增引物的上游序列。

　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示：

　　1、引物設(shè)計(jì)

　　2、引物示例

　　實(shí)驗(yàn)流程：

　　設(shè)計(jì)引物-合成引物

　　使用方法：

miRNA-莖環(huán)法-逆轉(zhuǎn)錄引物（*****-RT）稀釋方法：

1.引物附在離心管內(nèi)壁上，稀釋前請(qǐng)將引物離心數(shù)秒使干粉聚集至管底，小心開啟管蓋，以免引起粉末飛揚(yáng)造成損失；

2.將所有逆轉(zhuǎn)錄引物（-RT，以及U6-A）稀釋成100μM：按照管壁上的nmol數(shù)加入10倍體積的無酶水（Water Nuclease-Free，Servicebio，貨號(hào):G4700）；

3.以上稀釋引物各取1μL（-RT，以及U6-A）加入到一個(gè)新的無菌無酶離心管，用無酶水補(bǔ)齊到100ul，混合均勻，即為Gene Specific Primer (1 μM)；

逆轉(zhuǎn)錄操作步驟（參考）

以SweScript RT II First Strand cDNA Synthesis Kit (With gDNA Remover)（Servicebio, G3333）為例：

1. 基因組去除：配制基因組去除反應(yīng)體系(推薦10 μL)：

2. 第一鏈cDNA合成

(1) 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系配制（推薦20 μL反應(yīng)體系）：

輕輕混勻并離心；

(2) 逆轉(zhuǎn)錄程序設(shè)置：

　　基因名稱和種屬、或基因ID號(hào)、或成熟的RNA序列；成熟的miRNA有3p和5p之分，故需要告知設(shè)計(jì)3p還是5p，可以參考相關(guān)文獻(xiàn)。

僅供科研用途，不可用于臨床診斷！